M 199培養(yǎng)基的改良可使疫苗增產(chǎn)

M199是經(jīng)典的細(xì)胞培養(yǎng)基，也常作為疫苗生產(chǎn)用的培養(yǎng)液，用于地鼠腎細(xì)胞、原代雞胚細(xì)胞、Vero細(xì)胞的大規(guī)模培養(yǎng)。這其中，也添加有新生牛血清，水解乳蛋白等。

近年有文獻(xiàn)報(bào)道，改良的M199比經(jīng)典的M199的效果更好1。但具體的改良配方并未透露，只提到調(diào)整了氨基酸等營養(yǎng)成分的配比。因此，如果在不升高成本的情況下，改用改進(jìn)后的M199培養(yǎng)基，會帶來更好的細(xì)胞培養(yǎng)效果和經(jīng)濟(jì)效益。

在現(xiàn)有培養(yǎng)基中，SFRE199是值得關(guān)注的，它恰好是M199的改良型。它的改進(jìn)方面主要為：1、升高了葡萄糖和8種氨基酸（精氨酸-鹽酸、半胱氨酸、胱氨酸、L -谷氨酰胺、L -谷氨酸、甘氨酸、組氨酸、酪氨酸）的濃度，使其達(dá)到促進(jìn)細(xì)胞的**活力，而又不產(chǎn)生毒性；2、加入了硫酸鋅、丙酮酸鈉和魚精蛋白鋅胰島素。3、降低了硝酸鐵、黃嘌呤和碳酸氫鈉的濃度。4、加入了半乳糖。實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，半乳糖可使細(xì)胞培養(yǎng)液中的乳酸降低54%3，使pH保持穩(wěn)定。

SFRE199最初是用于原代狒狒腎細(xì)胞的培養(yǎng)3，后來也有用于牛輸卵管峽部上皮細(xì)胞和壺腹上皮細(xì)胞的培養(yǎng)。其特點(diǎn)是，都只用了SFRE199，而沒有添加血清，細(xì)胞的培養(yǎng)效果仍然理想。值得注意的是，原代細(xì)胞較細(xì)胞系難培養(yǎng)，因此，SFRE199中升高的氨基酸和葡萄糖濃度，顯然更有利于原代細(xì)胞的生長。同時(shí)，上述細(xì)胞都屬于泌尿生殖系細(xì)胞。Vero細(xì)胞、地鼠腎細(xì)胞與上述細(xì)胞的起源相同，可以想見，SFRE199也同樣非常有可能適用于這些疫苗生產(chǎn)細(xì)胞的培養(yǎng)。事實(shí)上，國外在1992年時(shí)即有報(bào)道3，用SFRE199作為化學(xué)限定培養(yǎng)基的一部分，用于Vero細(xì)胞的靜置培養(yǎng)和懸浮培養(yǎng)，只不過還添加了BSA和血清替代物等，并且發(fā)現(xiàn)，SFRE199培養(yǎng)的效果**。而在實(shí)際應(yīng)用中，用SFRE199替代M199，同時(shí)降低牛血清的用量，也是非常有可能的，從而降低生產(chǎn)成本。

在SFRE199對M199的改進(jìn)中，值得注意的是添加了硫酸鋅和胰島素。有研究者發(fā)現(xiàn)，如果在SFRE199中去除這2個(gè)成分，則細(xì)胞二倍分裂時(shí)間延長，細(xì)胞不能很快長滿，若含有這2種成分，則該培養(yǎng)基支持生長的能力相當(dāng)于標(biāo)準(zhǔn)對照血清培養(yǎng)基3。

因此，如果疫苗生產(chǎn)企業(yè)目前用的培養(yǎng)液是M199，則推薦更換為SFRE199，因?yàn)樯a(chǎn)成本沒有增加，而細(xì)胞生長和病毒滴度卻可有一個(gè)理想的結(jié)果。

參考文獻(xiàn)

1. 陳嘉雯，等. 改良M199培養(yǎng)基在Vero細(xì)胞培養(yǎng)中的適用性. 中國生物制品學(xué)雜志. 2014, 27(1): 76-77

2. 吳長安. 無血清化學(xué)限定培養(yǎng)基對原代細(xì)胞的培養(yǎng)及其對病毒的敏感性。《國外醫(yī)學(xué).生物制品分冊》. 1981年04期

3. Jack Litwin. The growth of Vero cells in suspension as cell-aggregates in serum-free media. Cytotecnology 10:169-174,1992