方便雙歧桿菌計(jì)數(shù)的顯色培養(yǎng)基

近年來，雙歧桿菌作為益生菌，越來越得到人們的重視。一方面，在生產(chǎn)中，需要進(jìn)行雙歧桿菌的培養(yǎng)，另一方面，在酸乳等食品乳品中，又需要雙歧桿菌的計(jì)數(shù)。因?yàn)殡p歧桿菌只有活菌數(shù)達(dá)到106 CFU/mL以上時(shí)，才能發(fā)揮正常生理功能；數(shù)量太少，則達(dá)不到保健的效果。

在培養(yǎng)雙歧桿菌時(shí)，需要了解雙歧桿菌為專性厭氧菌，適宜生長(zhǎng)的環(huán)境pH值為6.7~7.0。它為革蘭氏陽(yáng)性，無運(yùn)動(dòng)性，包括至少25個(gè)種，適合生長(zhǎng)溫度在25℃-45℃。雙歧桿菌對(duì)碳水化合物的代謝終產(chǎn)物為乳酸和醋酸。

雙歧桿菌原本可以作為指示菌，因?yàn)樗诩S便中出現(xiàn)的頻率非常高。有人研究發(fā)現(xiàn)，嬰兒出生后母乳喂養(yǎng)一周，腸道中雙歧桿菌數(shù)可占92%，而健康成年人僅有10%。但雙歧桿菌生長(zhǎng)緩慢，且嚴(yán)格厭氧，培養(yǎng)很不方便，因此并沒有作為糞便的指示菌。

當(dāng)今食品發(fā)展的趨勢(shì)是，應(yīng)用雙歧桿菌越來越多，且乳桿菌與雙歧桿菌同時(shí)添加。這種混合發(fā)酵，多見于酸奶與保健品。在酸奶中，常應(yīng)用嗜熱鏈球菌與保加利亞乳桿菌在牛奶中發(fā)酵 , 以使產(chǎn)品具有酸奶特有的細(xì)膩圓潤(rùn)的凝乳狀態(tài)。而如果只單一使用雙歧桿菌發(fā)酵，則風(fēng)味與口感不佳。但混合發(fā)酵也帶來一個(gè)問題，即給雙歧桿菌的計(jì)數(shù)帶來麻煩。一方面，雙歧桿菌與乳桿菌都屬于乳酸菌，性能接近，另一方面，雙歧桿菌隨著傳代次數(shù)增多，會(huì)發(fā)生變異成桿狀，因此通過鏡下形態(tài)鑒別不太可靠。如果能有一款商品化的雙歧桿菌顯色培養(yǎng)基，則可給雙歧桿菌的鑒別和計(jì)數(shù)帶來極大的便捷。

世界知名微生物培養(yǎng)基生產(chǎn)商HiMedia開發(fā)有一款雙歧桿菌顯色培養(yǎng)基（品名：HiCrome?Bifidobacterium Agar），它可用于雙歧桿菌與乳桿菌混合發(fā)酵的酸乳等制品菌落的鑒別計(jì)數(shù)。該顯色培養(yǎng)基中含有特別蛋白胨、牛奶蛋白、氯化鈉、顯色劑和瓊脂。牛奶蛋白能檢測(cè)雙歧桿菌的酪蛋白水解活性，從而使菌落表現(xiàn)出光暈。顯色劑則可鑒別乳桿菌和雙歧桿菌。乳桿菌屬通常表現(xiàn)為綠色菌落和霧狀背景（發(fā)酵乳桿菌例外，菌落為粉色，無光暈），雙歧桿菌則根據(jù)物種不同，菌落顏色也有所區(qū)別：嬰兒雙歧桿菌表現(xiàn)為深藍(lán)色至藍(lán)綠色菌落。短雙歧桿菌表現(xiàn)為粉紅色菌落，并且有光暈。據(jù)了解，雙歧桿菌在成人體內(nèi)的菌種主要是青春雙歧桿菌和長(zhǎng)雙歧桿菌。在嬰兒為嬰兒雙歧桿菌和短雙歧桿菌。

圖. 右上為嬰兒雙岐桿菌ATCC 25962，左上為短雙歧桿菌ATCC 15698，下為植物乳桿菌ATCC 8014

雙歧桿菌在許多制品以及人和動(dòng)物腸道內(nèi)，大多與其他菌（如乳酸菌）混合生長(zhǎng)，而且生長(zhǎng)特點(diǎn)相近，很難區(qū)分。要對(duì)其進(jìn)行計(jì)數(shù)，需設(shè)計(jì)特定的選擇培養(yǎng)基。雙歧桿菌顯色培養(yǎng)基一方面要求能保證雙歧桿菌的生長(zhǎng)，同時(shí)要求選擇性高，對(duì)雜菌的抑制性強(qiáng)，雙歧桿菌菌落呈現(xiàn)顯著的顏色或形態(tài)上的特征。傳統(tǒng)培養(yǎng)雙歧桿菌培養(yǎng)時(shí)間較長(zhǎng)，需要 96小時(shí)才能出結(jié)果，而該顯色培養(yǎng)基則只需在無氧條件下35-37℃孵育48小時(shí)，即可知道準(zhǔn)確結(jié)果。顯色培養(yǎng)方法的特異性也很高，能夠保證培養(yǎng)結(jié)果的準(zhǔn)確性。

HiCrome?雙歧桿菌顯色培養(yǎng)基能快速有效地檢測(cè)雙歧桿菌，這對(duì)于辨別產(chǎn)品中添加雙歧桿菌的數(shù)量具有重要意義。HiCrome?雙歧桿菌顯色培養(yǎng)基能實(shí)現(xiàn)一步培養(yǎng)直接計(jì)數(shù)，基本能夠滿足實(shí)驗(yàn)室對(duì)雙歧桿菌初步檢測(cè)計(jì)數(shù)的需要，特別適合不擁有大型細(xì)菌鑒定儀的中小企業(yè)和第三方實(shí)驗(yàn)室。

圖. 短雙歧桿菌

圖. 植物乳桿菌