簡(jiǎn)單介紹透析胎牛血清應(yīng)用

透析胎牛血清是牛血清中比較特殊的一種，一些實(shí)驗(yàn)規(guī)定必需要用透析胎牛血清培養(yǎng)，那么我們介紹下什么是透析胎牛血清。

透析胎牛血清和胎牛血清的**區(qū)別是，前者透析祛除了分子量在1萬(wàn)以下的小分子，如葡萄糖、鹽、氨基酸、激素，此外在其他工藝方面沒(méi)有任何區(qū)別。

透析胎牛血清也是用于細(xì)胞培養(yǎng)，但同時(shí)，又有自己的一些特殊應(yīng)用。其用途可歸納如下：

一、摻入研究

例如：有人研究呼吸道合胞病毒的宿主特異性：即為什么它只感染呼吸道上皮細(xì)胞，而不感染其他細(xì)胞。

他們將該病毒的F蛋白（融合蛋白）序列克隆入質(zhì)粒內(nèi)，并轉(zhuǎn)染293T細(xì)胞。轉(zhuǎn)染后第20小時(shí)，細(xì)胞先在不含蛋氨酸和半胱氨酸的DMEM+透析胎牛血清中培養(yǎng)了45分鐘（讓細(xì)胞處于饑餓狀態(tài)，因培養(yǎng)基中缺少氨基酸），再在同樣上述培養(yǎng)基中培養(yǎng)，但添加了35S標(biāo)記的蛋氨酸和半胱氨酸。

培養(yǎng)4小時(shí)后進(jìn)行分析。即裂解細(xì)胞后，用抗F蛋白的抗體捕獲F蛋白、跑膠并進(jìn)行放射自顯影，分析F蛋白的表達(dá)情況。發(fā)現(xiàn)F蛋白的表達(dá)確實(shí)增加了，但突變后的F蛋白表達(dá)卻無(wú)任何變化。結(jié)果證實(shí)，野生型的F蛋白確實(shí)參與病毒對(duì)宿主細(xì)胞的侵襲。

值得指出的是，用35S標(biāo)記的蛋氨酸和半胱氨酸用來(lái)標(biāo)記細(xì)胞內(nèi)的蛋白，結(jié)合免疫沉淀用于觀察在某一過(guò)程中發(fā)生的某一蛋白的變化，從而發(fā)現(xiàn)該蛋白所扮演的角色，的確是一個(gè)普遍有效的方法（在研究信號(hào)分子磷酸化的方面，則需要使用32P標(biāo)記的磷酸鹽）。

在這其中，透析胎牛血清的使用必不可少，即給細(xì)胞創(chuàng)造一個(gè)無(wú)外源氨基酸干擾的環(huán)境。

二、細(xì)胞水平的藥物篩選

例如：有人要從化合物庫(kù)中篩選S1P4受體的拮抗劑，以抑制流感病毒帶來(lái)的免疫激活導(dǎo)致的肺損傷。他采用報(bào)告基因進(jìn)行監(jiān)測(cè)。為了避免細(xì)胞培養(yǎng)環(huán)境中存在的小分子的干擾，他也需要用10%的透析胎牛血清加McCoy's 5A培養(yǎng)基來(lái)培養(yǎng)細(xì)胞。

類似在藥物研發(fā)過(guò)程中，采用特定啟動(dòng)子操縱的熒光素酶報(bào)告基因，基于細(xì)胞平臺(tái)的高通量藥物篩選，也都需要無(wú)外源小分子的培養(yǎng)體系，因而也要用透析胎牛血清。

三、細(xì)胞克隆的篩選

包括雜交瘤細(xì)胞和CHO細(xì)胞等，由于在進(jìn)行細(xì)胞篩選時(shí)，需要無(wú)外源小分子如次黃嘌呤和胸腺嘧啶等的干擾，因此也需要用到透析胎牛血清。