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支原體檢測系列——德國MB產(chǎn)品綜述（一）

2020-10-29 14:35來源：威正翔禹|締一生物

支原體放行檢測，在臨床相關(guān)的項目中非常重要，例如：干細(xì)胞治療項目、免疫細(xì)胞治療項目、CAR-T項目、抗體藥生產(chǎn)、疫苗生產(chǎn)，另外還有一些重要的細(xì)胞培養(yǎng)，細(xì)胞典藏項目，都需要對培養(yǎng)的細(xì)胞或收獲的產(chǎn)物，完成準(zhǔn)確的支原體檢測，以確保產(chǎn)物沒有支原體污染。


工作要求

使用的支原體檢測方法和產(chǎn)品，需要能達(dá)到：

結(jié)果準(zhǔn)確，操作簡便，出結(jié)果快，

需要時，還能完成方法學(xué)驗證。

確有必要，有些方法還能符合各國《藥典》的要求。


當(dāng)你在全球范圍內(nèi)瀏覽了無數(shù)關(guān)于支原體的文章和介紹后，你會有一個有趣的發(fā)現(xiàn)：

最終引起大家興趣的文章，大多指向了德國的同一家公司，名叫：Minerva Biolabs，簡稱MB公司。


他只專注地研發(fā)和生產(chǎn)支原體和軍團(tuán)菌產(chǎn)品，使得不但MB的品牌在歐洲廣為流傳，而且全球能數(shù)出來的若干大品牌的支原體產(chǎn)品，大多也都是由這家生產(chǎn)后貼牌出來的。他位于德國柏林的郊外，已經(jīng)在這里靜悄悄地工作了幾十個年頭。


中國締一生物公司在2008年率先把MB的源頭產(chǎn)品引入中國，在過去的十幾年里，MB的產(chǎn)品已經(jīng)為為中國的疫苗生產(chǎn)、干細(xì)胞治療、以及“少數(shù)民族細(xì)胞典藏”、“世界**細(xì)胞典藏”等重要項目，提供了有力的支持和幫助。


以下小編會在兩個系列文章中，把MB公司關(guān)于支原體檢測和支原體祛除的不同產(chǎn)品，以通覽的形式介紹給大家，希望對中國的生物科研和質(zhì)檢人員，能有所幫助。


德國MB產(chǎn)品綜述（一）

——支原體檢測系列

這篇文章分為以下四個部分：

一、支原體檢測試劑盒

（一）常規(guī)PCR方法

（二）熒光定量PCR方法

二、支原體DNA提取試劑盒

三、方法驗證用支原體標(biāo)準(zhǔn)品

（一）靈敏度驗證用標(biāo)準(zhǔn)品

（二）支原體基因組DNA（拷貝數(shù)已標(biāo)定）

（三）支原體基因組DNA（特異性驗證用）

四、方法驗證輔助產(chǎn)品

具體詳情如下：

一、支原體檢測試劑盒

（一）常規(guī)PCR方法


品名

用途說明

貨號/規(guī)格

1.支原體常規(guī)PCR檢測試劑盒（一步法）

1）適合科研單位檢測，或單位內(nèi)檢，用PCR法檢測細(xì)胞或其他生物基質(zhì)。

2) 比藥典操作標(biāo)準(zhǔn)合并了一步，（將內(nèi)控對照試劑預(yù)先混合在PCR mix試劑中），操作更簡潔。

3)樣本量為2μl，靈敏度為20個基因組拷貝/反應(yīng)。結(jié)果準(zhǔn)確。

11-8025

25Tests/盒

11-8050

50Tests/盒

11-8100

100Tests/盒

11-8250

250Tests/盒

2.支原體常規(guī)PCR檢測試劑盒（經(jīng)典法，不含Taq酶）


1) 符合歐洲藥典、中國藥典要求，更適合細(xì)胞治療，CAR-T，抗體藥、疫苗等臨床項目申報和質(zhì)檢。

2）樣本需先做DNA抽提。抽提后樣本加入量為10μl。

3）試劑盒中不含Taq酶，需另外購買。

4) 廠家可協(xié)助完善方法驗證步驟。

11-1025

25Tests/盒

11-1050

50Tests/盒

11-1100

100Tests/盒

11-1250

250Tests/盒

3.支原體常規(guī)PCR檢測試劑盒（經(jīng)典法，含Taq酶）

1) 符合歐洲藥典、中國藥典要求，更適合細(xì)胞治療，CAR-T，抗體藥、疫苗等臨床項目申報和質(zhì)檢。

2）樣本需先做DNA抽提。抽提后樣本加入量為10μl。

3）試劑盒中含Taq酶，無需另外購買。

4) 廠家可協(xié)助完善方法驗證步驟。

11-1025G

25Tests/盒

11-1050G

50Tests/盒

11-1100G

100Tests/盒

11-1250G

250Tests/盒

4.支原體常規(guī)PCR檢測試劑盒（預(yù)分裝法）

1）適合科研單位檢測，或單位內(nèi)檢，用PCR法檢測細(xì)胞或其他生物基質(zhì)。

2) 比一步法更為方便。表現(xiàn)在：

① PCR組分（包括酶、核苷酸、引物、內(nèi)控對照，均為凍干粉）和上樣緩沖液/染料已預(yù)先分裝在八連管中。

② PCR結(jié)束后，產(chǎn)物直接上膠，不需再加上樣緩沖液和染料。

3)價格比一步法略高。適合想節(jié)省時間、追求簡易的用戶。

11-7024

24Tests/盒

11-7048

48Tests/盒

11-7096

96Tests/盒

11-7240

240Tests/盒



熒光定量PCR(qPCR)方法


品名

用途說明

貨號/規(guī)格

1.支原體熒光定量PCR(qPCR)檢測試劑盒

（經(jīng)典法）

1) 符合歐洲藥典、中國藥典要求，更適合細(xì)胞治療，CAR-T，抗體藥、疫苗等臨床項目申報和質(zhì)檢。

2）樣本需先做DNA抽提。抽提后樣本加入量為10μl。

3) 廠家可協(xié)助完善方法驗證步驟。

11-9025

25Tests/盒

11-9100

100Tests/盒

11-9250

250Tests/盒

2.支原體熒光定量PCR(qPCR)檢測試劑盒（一步法）

1）適合科研單位檢測，或單位內(nèi)檢，用熒光定量PCR(qPCR)法檢測細(xì)胞或其他生物基質(zhì)。

2) 比藥典操作標(biāo)準(zhǔn)合并了一步，（將內(nèi)控對照試劑預(yù)先混合在PCR mix試劑中），操作更簡潔。

3)樣本量為2μl，靈敏度為50個基因組拷貝/反應(yīng)。結(jié)果準(zhǔn)確。

11-91025

25Tests/盒

11-91100

100Tests/盒

11-91250

250Tests/盒



支原體DNA提取試劑盒


品名

用途說明

貨號/規(guī)格

支原體DNA提取試劑盒

1）遵循藥典標(biāo)準(zhǔn)的支原體檢查、或樣本中存在PCR抑制劑時，必須進(jìn)行支原體DNA抽提。

2）研究領(lǐng)域細(xì)胞上清中的支原體檢查不需要DNA抽提。

56-1010

10Tests/盒

56-1050

50Tests/盒

56-1200

200Tests/盒



方法驗證用支原體標(biāo)準(zhǔn)品（替代藥典方法需要驗證）

靈敏度驗證用標(biāo)準(zhǔn)品


品名

用途說明

貨號/規(guī)格

10CFU?靈敏度標(biāo)準(zhǔn)品單品

（詳見注解①）

為滅活支原體菌株，用于核酸檢測法（PCR和qPCR）的靈敏度和耐用性驗證。

歐洲藥典要求，如替代培養(yǎng)法，檢測限需達(dá)到10CFU/ml。

102開頭

標(biāo)準(zhǔn)品3管+陰性對照2管/盒

10CFU?靈敏度標(biāo)準(zhǔn)品套裝（9種支原體）

（詳見注解①）


102-0002

標(biāo)準(zhǔn)品2管+陰性對照2管/盒

100CFU?靈敏度標(biāo)準(zhǔn)品

（詳見注解①）

為滅活支原體菌株，用于支原體核酸檢測法（PCR和qPCR）的靈敏度和耐用性驗證。

歐洲藥典要求，如替代指示細(xì)胞培養(yǎng)法，檢測限需達(dá)到100CFU/ml。

103開頭

標(biāo)準(zhǔn)品3管+陰性對照2管/盒


支原體基因組DNA（拷貝數(shù)已標(biāo)定）


品名

用途說明

貨號/規(guī)格

PCR絕對定量標(biāo)準(zhǔn)品

（詳見注解①）

從支原體中提取的基因組DNA并進(jìn)行精準(zhǔn)定量。梯度稀釋后，用于支原體核酸檢測法（PCR和qPCR）標(biāo)準(zhǔn)曲線繪制和檢測限的確定。

52開頭

1×108拷貝/管 + 緩沖液3管/盒


支原體基因組DNA（特異性驗證用）


品名

用途說明

貨號/規(guī)格

支原體基因組DNA（特異性驗證用）

（詳見注解②）

從支原體中提取的基因組DNA并進(jìn)行粗略定量，用于支原體核酸檢測法（PCR和qPCR）的特異性驗證，可作為陽性對照。

51開頭

1管標(biāo)準(zhǔn)品（≈10ng）+ 1管緩沖液/盒


方法驗證輔助產(chǎn)品


品名

用途說明

貨號/規(guī)格

內(nèi)控對照（PCR經(jīng)典法用）

當(dāng)MB試劑盒原有內(nèi)控對照不夠用，或其他核酸檢測法需要驗證時，可使用內(nèi)控對照。可加到PCR或qPCR反應(yīng)體系中。也可加到支原體DNA抽提的樣本中，以驗證DNA抽提過程。

11-1905

4管/盒

內(nèi)控對照（qPCR經(jīng)典法用）


11-9905

4管/盒



*注解①

單品如下：

精氨酸支原體

口腔支原體

雞敗血支原體

肺炎支原體

關(guān)節(jié)液支原體

發(fā)酵支原體

豬鼻支原體

萊氏無膽甾原體

檸檬螺原體

唾液支原體（套裝不含此單品）


注解②

單品如下：

精氨酸支原   

發(fā)酵支原體   

生殖支原體

豬鼻支原體

滲透支原體

關(guān)節(jié)液支原體

關(guān)節(jié)炎支原體

雞毒支原體

人型支原體

口腔支原體

肺炎支原體

檸檬螺旋原體

解脲支原體


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