支原體qPCR檢測(cè)的結(jié)果詮釋

支原體qPCR檢測(cè)不僅用于細(xì)胞培養(yǎng)的支原體篩查，也用于生物制品行業(yè)的放行檢測(cè)，但前提是要有方法驗(yàn)證。

無(wú)論是否遵循藥典，支原體qPCR檢測(cè)的結(jié)果判定都需要一定的標(biāo)準(zhǔn)。下面小編結(jié)合德國(guó)MB廠家的支原體qPCR說明書及相關(guān)文件，給予進(jìn)一步的闡釋。

一、熒光檢測(cè)通道的結(jié)果詮釋

用MB公司的qPCR試劑盒檢測(cè)時(shí)，qPCR儀的FAM通道檢測(cè)支原體熒光信號(hào)，HEX通道檢測(cè)內(nèi)控對(duì)照（簡(jiǎn)稱IC）的熒光信號(hào)（如沒有HEX通道，可用VIC通道）。IC是用于監(jiān)測(cè)qPCR反應(yīng)是否正常。對(duì)于這兩個(gè)通道，Ct＜40為陽(yáng)性結(jié)果。Ct≥40為陰性結(jié)果。支原體DNA和IC存在信號(hào)的競(jìng)爭(zhēng)性抑制。

在陰性對(duì)照和陽(yáng)性對(duì)照均結(jié)果正常的前提下，根據(jù)FAM?通道和HEX通道的檢測(cè)結(jié)果，可判別樣品是否有支原體污染。具體見下表：

表1. FAM?通道
(支原體) 和HEX? (IC) 通道的結(jié)果詮釋

需要說明的是：

內(nèi)控對(duì)照可在支原體DNA抽提時(shí)加入。如果結(jié)果無(wú)效，則說明抽提失敗，或者qPCR存在抑制。如果內(nèi)控對(duì)照是在qPCR反應(yīng)時(shí)加入，則說明qPCR存在抑制。

二、對(duì)照與樣品的結(jié)果詮釋（適用于符合EP/JP的檢測(cè)）

對(duì)于遵循EP/JP的檢測(cè)，具體數(shù)據(jù)詮釋見表2。

表2.結(jié)果判定的前提是：qPCR檢測(cè)試劑盒符合EP/JP的要求。

三、MB公司支原體qPCR試劑盒(經(jīng)典法)

德國(guó)MB公司的支原體qPCR檢測(cè)試劑盒(經(jīng)典法)(英文名：Venor?Gem qEP)經(jīng)過廠家全面的方法驗(yàn)證，符合歐洲藥典/日本藥典要求，適合細(xì)胞治療，CAR-T，抗體藥、疫苗等臨床項(xiàng)目申報(bào)和質(zhì)檢。

需注意樣本要先做DNA抽提，再進(jìn)行qPCR檢測(cè)。MB還提供用于PCR/qPCR方法驗(yàn)證的配套的支原體10CFU、100CFU菌株標(biāo)準(zhǔn)品、特異性驗(yàn)證用支原體基因組DNA和細(xì)菌基因組DNA、支原體DNA絕對(duì)定量標(biāo)準(zhǔn)品（基因組拷貝數(shù)經(jīng)嚴(yán)格標(biāo)定）。

四、德國(guó)MB公司介紹

德國(guó)MB公司，全稱Minerva Biolabs，是世界**的微生物污染控制公司，成立于1999年，總部位于德國(guó)柏林。

公司創(chuàng)始人來自于全球聞名的羅伯特?科赫微生物研究所。

二十年來，MB公司專注于微生物污染檢測(cè)與清除，

特別是支原體和軍團(tuán)菌的技術(shù)和產(chǎn)品，在世界上遙遙領(lǐng)先。

1.自1999年起即研發(fā)細(xì)胞培養(yǎng)和生物藥工業(yè)用QC檢測(cè)試劑

2.配備生物安全二級(jí)實(shí)驗(yàn)室

3.GMP級(jí)潔凈車間生產(chǎn)

4.世界**的支原體PCR檢測(cè)試劑供應(yīng)商

5.IOM和PDA成員

6.ISO 9001和ISO 13485認(rèn)證

注：IOM全稱Institute of Medicine

PDA全稱Parenteral Drug Association

2007年，上海威正翔禹生物科技有限公司作為MB公司的全國(guó)總代理，將支原體檢測(cè)防控的優(yōu)秀產(chǎn)品引入中國(guó)。十幾年來，不斷為中國(guó)生物研究實(shí)驗(yàn)室，以及眾多生物制藥企業(yè)，提供了完整高效的支原體等微生物檢測(cè)及祛除解決方案。

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