細胞培養(yǎng)進口血清進口胎牛血清進口新生牛血清進口豬血清馬血清- 支原體檢測盒及標準品常規(guī)PCR檢測試劑盒熒光定量PCR檢測（qPCR法）支原體DNA提取靈敏度標準品（方法驗證用）特異性標準品（方法驗證用）PCR定量標準品（可用于方法驗證）
支原體祛除試劑細胞中支原體祛除環(huán)境支原體祛除水槽支原體祛除
干細胞培養(yǎng)基- DNA/RNA污染祛除DNA/RNA污染祛除試劑DNA污染監(jiān)測
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DIY判斷細胞的支原體污染2021-09-24 16:13
在細胞培養(yǎng)過程中，病原污染可以算得上是科研工作者的噩夢了。其中支原體污染更像是一個無形的殺手，時刻威脅著細胞的安全。  細菌真菌污染還有跡可循，起碼顯微鏡下能夠清晰地看到，但是支原體個子小，不易觀察，由于繁殖速度比較慢，前期感染幾乎沒有癥狀。經(jīng)常稍不留意，就中了支原體的「陰招」。統(tǒng)計顯示，全球大約有60%左右的細胞培養(yǎng)存在或曾經(jīng)存在過支原體污染。
那到底如何判斷細胞究竟有沒有感染支原體？今天我們就來從原理上深扒一下，網(wǎng)傳的肉眼判斷是否感染支原體大法到底正不正確！ 支原體感染癥狀1：細胞生長緩慢甚至死亡？ 被廣泛使用的細胞培養(yǎng)基，不僅給細胞提供支持和養(yǎng)分，對于支原體而言，也是天堂一般的存在。 適宜的溫度（37℃） 合適的PH（7-8之間都可生存） 充足的養(yǎng)分（各種氨基酸、生長因子等） 一定的二氧化碳（5%左右） 與細胞培養(yǎng)高度重合的培養(yǎng)條件，注定了支原體要與細胞共同競爭有限的生存資源。 早有研究表明[1]，一些支原體（包括最為常見的人型支原體、發(fā)酵支原體、精氨酸支原體等），通過精氨酸脫亞胺酶分解精氨酸來供能。當這些支原體混入細胞培養(yǎng)體系后，會與細胞爭搶精氨酸，導致細胞「吃不飽飯」，出現(xiàn)營養(yǎng)不良的癥狀：生長速率異常、活力下降、易脫壁等等。
而精氨酸又是細胞組蛋白的重要組成成分，缺乏精氨酸會嚴重影響組蛋白合成，引起染色體斷裂。再加上細胞處于長期饑餓的狀態(tài)，最終導致細胞生長變慢甚至死亡。 支原體感染癥狀2：細胞變形、碎片增加、易聚團、有小黑點？ 支原體通過黏附作用與細胞結(jié)合，獲取細胞膜表面的脂質(zhì)和膽固醇，破壞細胞膜的完整性，同時影響細胞間的信號傳遞。支原體會趁機侵入細胞，增加細胞中核酸內(nèi)切酶的含量[2]，導致細胞染色體異常進而死亡。
經(jīng)過支原體的這一番操作，細胞結(jié)構(gòu)已經(jīng)被嚴重破壞，隨之而來的就是細胞形態(tài)改變、細胞易聚團、大面積細胞凋亡制造的蛋白碎片（也就是培養(yǎng)基中的碎片和小黑點）[3]。 支原體感染癥狀3：培養(yǎng)基易變黃？ 我們都知道，正常情況下，培養(yǎng)基中養(yǎng)分會逐漸耗盡，細胞代謝廢物會逐漸累積，上清液會變成黃色，因此要定期更換培養(yǎng)基。 支原體也是如此——當培養(yǎng)體系中感染了支原體并大量繁殖的時候，會向外排放代謝產(chǎn)物，影響體系中的PH，加快培養(yǎng)基變黃的速度。 綜上所述，如果你培養(yǎng)的細胞出現(xiàn)以下情況，基本可以確定是支原體感染了，不放心的話可以再配合支原體檢測試劑（檢測神器幫你揪出培養(yǎng)基中的支原體！）進一步確認。 細胞被支原體污染后的表現(xiàn) ①細胞生長緩慢 ②細胞變形 ③培養(yǎng)基中碎片增加 ④細胞易聚團 ⑤鏡下觀察有小黑點 ⑥培養(yǎng)基提前變色 除了影響細胞活力，支原體還會給細胞帶來的幾百種基因表達的改變,包括編碼受體、離子通道、生長因子的基因和癌基因等方面[4]。它包含高度富含免疫原性的脂蛋白，可以錨定在胞膜的外表面，被TLR2等免疫細胞的受體識別。激活NF-kB途徑，進一步導致細胞活化[5]，偏離最終的實驗結(jié)果。 今天的細胞培養(yǎng)小課堂到這里就結(jié)束了，希望可以幫你解決實驗上的一些疑惑！ 參考文獻： [1] Fenske, J. D. , & Kenny, G. E. . (1976). Role of arginine deiminase in growth of mycoplasma hominis. Journal of Bacteriology, 126(1), 501-10. [2] Sokolova, I. , Vaughan, A. , & Khodarev, N. . (1998). Mycoplasma infection can sensitize host cells to apoptosis through contribution of apoptotic-like endonuclease(s). Immunology & Cell Biology, 76(6), 526-534. [3] Lincoln, C. K. , & Gabridge, M. G. . (1998). Chapter 4 cell culture contamination: sources, consequences, prevention, and elimination. Methods in Cell Biology, 57, 49-65. [4] Miller, C. J. , Kassem, H. S. , Pepper, S. D. , Hey, Y. , Ward, T. H. , & Margison, G. P. . (2017). Mycoplasma infection significantly alters microarray gene expression profiles. China Modern Medicine, 35(4), 812-814. [5]倪博, 白方方, 劉茂軍, 馮志新, 熊祺琰, & 魏建忠等. (2013). 支原體脂蛋白及其變異與宿主互作研究進展. 生物技術(shù)通報, 1(002), 49-54. 如果你對支原體相關檢測產(chǎn)品感興趣，想要了解更多，歡迎訪問 北京締一生物官網(wǎng)：www.dyshengwu.com 或聯(lián)系北京締一生物公司 咨詢熱線： 400-166-8600 010-84118494 021-64186645 13811167915 咨詢QQ: 1580434811 咨詢QQ: 1258888686 客服郵箱：servicebj@viansaga.com 客服郵箱：servicesh@viansaga.com 聲明：本網(wǎng)站所有注明“來源：締一生物”的內(nèi)容，版權(quán)均屬于北京締一生物網(wǎng)站所有，受到知識產(chǎn)權(quán)的法律保護。如需引用、轉(zhuǎn)載，須注明來源及原文鏈接。如內(nèi)容涉及實質(zhì)性修改，須來電獲取書面授權(quán)，且轉(zhuǎn)載時，須注明“來源：締一生物”。 最終解釋權(quán)歸締一生物所有。 上一篇： 支原體實驗室檢測方法大PK
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