支原體常規(guī)檢測方法匯總（三）

大家晚上好！

細(xì)胞培養(yǎng)過程中支原體檢測方法如約而至

第三期來啦！

還沒有看前兩期內(nèi)容的小伙伴

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支原體常規(guī)檢測方法匯總（一）

支原體常規(guī)檢測方法匯總（二）

上回書和上上回書說道

qPCR檢測法是一種目前比較常用

效果也比較可靠的方法

那除了qPCR

還有沒有其他方法可以檢測呢？

所以今天就來講講

分離培養(yǎng)法和DNA染色法

有請兩位主角閃亮登場

簡單來說，這種方法的基本原理就是：

分離，然后培養(yǎng)

聽君一席話如聽一席話

展開來講，就是從可疑的細(xì)胞培養(yǎng)體系中取樣，接種到適宜支原體生長的瓊脂平板上。如果樣本中含有支原體，它們就會在這種瓊脂平板上瘋狂生長，最終形成明顯可見的特征性菌落。

操作規(guī)范的情況下，這種方法很少會出現(xiàn)假陰性結(jié)果，檢測精確度很高，因此被譽為支原體檢測金標(biāo)準(zhǔn)。

缺點就是檢測時間太長，支原體要長出明顯克隆至少需要4周時間。另一方面，盡管可以檢測絕大多數(shù)支原體種類，分離培養(yǎng)法也有力所不及的時候，例如支原體M. Hyorhinis。因此，該方法能鑒定的支原體種類有限，成為它的另一個缺點。

該方法的實驗思路是：

培養(yǎng)指示細(xì)胞

?

樣品上清液收集

?

上清液接種

?

染色觀察結(jié)果

這一波操作看起來有點復(fù)雜，那展開說說：

將供試品接種于指示細(xì)胞（無污染的Vero 細(xì)胞或經(jīng)國家藥品檢定機構(gòu)認(rèn)可的其他細(xì)胞，供試品應(yīng)對該細(xì)胞生長無影響。下面以Vero細(xì)胞為例）中培養(yǎng)后，用特異熒光染料（如Hoechst 33258）染色，支原體中的核酸也可以被著色，因此，如果待檢測細(xì)胞中含有支原體，那么就會導(dǎo)致指示細(xì)胞被感染，進(jìn)而在細(xì)胞膜或培養(yǎng)基等處發(fā)現(xiàn)藍(lán)色熒光（支原體附著在細(xì)胞膜上，也有可能游離在細(xì)胞培養(yǎng)基中）。

對于DNA染色法方法，優(yōu)缺點也是很明顯的：

今天的兩種方法就介紹到這里啦，如果對支原體檢測感興趣，也可以點擊文末的閱讀原文，了解更多詳情！

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