細(xì)胞培養(yǎng)中的污染監(jiān)控與檢測——細(xì)菌

一、細(xì)菌污染

細(xì)菌概述

細(xì)菌是一種原核細(xì)胞微生物，一般為微米級(jí)別。細(xì)胞培養(yǎng)過程中常見的污染菌為大腸桿菌、葡萄球菌、假單胞菌等。

細(xì)菌污染癥狀

與其他污染相比，細(xì)菌污染在細(xì)胞培養(yǎng)過程中“發(fā)病”更為迅速，較容易被發(fā)現(xiàn)。具體表現(xiàn)為：

• 細(xì)胞培養(yǎng)基短期內(nèi)變黃且渾濁（大量酸性物質(zhì)累積）

• 靜置的培養(yǎng)液時(shí)不渾濁，但稍加震蕩，就有許多渾濁物漂起

• 可見培養(yǎng)液中有大量圓球狀顆粒物漂浮

• 細(xì)胞停止生長并有中毒表現(xiàn)，后出現(xiàn)大量死亡

細(xì)菌污染鑒定

簡易方法：

1、取少量培養(yǎng)液涂片染色檢查，憑經(jīng)驗(yàn)判斷細(xì)菌種類。

2、向肉湯培養(yǎng)基內(nèi)滴入少量培養(yǎng)液，37 ℃培養(yǎng)以檢測。

專業(yè)試劑盒檢測。以Minerva Biolabs公司的細(xì)菌PCR檢測試劑盒為例（點(diǎn)擊下方圖片直達(dá)微信商城，了解更多詳情）：

該試劑盒采用PCR方法，用于檢測生物樣品（包括細(xì)胞培養(yǎng)物和病毒貯存液）中是否存在細(xì)菌。根據(jù)序列分析，該試劑盒可檢測超過45種細(xì)菌屬，其中含污染細(xì)胞的常見菌屬：

試劑盒包括

凍干混合物：含引物/核苷酸/內(nèi)部擴(kuò)增對(duì)照DNA /聚合酶

復(fù)溶緩沖液

凍干的陽性對(duì)照DNA

PCR級(jí)水

樣本處理

樣本不用提DNA，只需熱滅活（95 °C 5分鐘）。樣本需不含抗生素。如含抗生素，則細(xì)胞應(yīng)在不含抗生素的培養(yǎng)基中再培養(yǎng)至少一代。

保質(zhì)期

2-8℃可保存至少6個(gè)月。

凍干試劑溶解后，需在-18℃以下保存。

結(jié)果分析：

內(nèi)控對(duì)照顯示PCR反應(yīng)正常，樣本中無PCR抑制成分。460bp左右存在目的條帶，提示存在細(xì)菌污染。

細(xì)菌污染的祛除

對(duì)于一般細(xì)胞：發(fā)生污染直接丟棄，并對(duì)環(huán)境進(jìn)行消殺，紫外線滅菌、消毒液擦拭培養(yǎng)箱、工作臺(tái)等。

對(duì)于重要且污染相對(duì)較輕的細(xì)胞：一般用抗生素的常用量的 5~10 倍作沖擊療法，用藥 24~48 小時(shí)后再換常規(guī)培養(yǎng)液，需要注意的是：

一旦發(fā)生污染后再使用抗生素常常難以根除，有的抗生素只有抑菌作用而無殺菌效應(yīng)。

且有研究表明，大量使用抗生素，或?qū)?xì)胞基因組產(chǎn)生影響。

詳情請(qǐng)移步細(xì)胞培養(yǎng)中的抗生素究竟是敵是友？