細(xì)胞培養(yǎng)環(huán)境的無菌控制

細(xì)胞培養(yǎng)中的

無菌環(huán)境

通常情況下，細(xì)胞培養(yǎng)需要在嚴(yán)格的無菌條件下進(jìn)行，既包括無菌環(huán)境，也包括無菌操作。今天就“細(xì)胞培養(yǎng)過程中，環(huán)境的無菌控制”這一話題，給大家分享一些小技巧，希望可以給各位的實驗提供幫助。

無菌室的結(jié)構(gòu)：

一般由更衣間、緩沖間、操作間三部分組成。

無菌室需進(jìn)行定期消毒和防污染處理：

1、采用每日（使用前）紫外照射（1－2小時）。

2、每周甲醛或過氧乙酸熏蒸（2小時），如果為了節(jié)省時間，也可以每周用新潔爾滅擦拭地面墻壁、桌面方式進(jìn)行消毒。另外，在實際操作過程中，還應(yīng)考慮無菌室建筑材料的差異來選擇合適的消毒方法。

3、防止無菌室的污染：通風(fēng)系統(tǒng)出風(fēng)口濾膜定期更換；進(jìn)出無菌室時，避免外界空氣直接對流進(jìn)無菌室的操作間。

4、定期使用支原體祛除試劑對桌面進(jìn)行噴灑或擦拭。

超凈工作臺的工作原理：

鼓風(fēng)機(jī)將外界空氣抽進(jìn)超凈臺，通過高效過濾器凈化，祛除空氣中的微生物，凈化的空氣吹過超凈臺的內(nèi)部空間，而將塵埃、細(xì)菌、病毒顆粒帶走，使工作區(qū)構(gòu)成無菌環(huán)境。

由于氣流在超凈工作臺中多的流動方向不同，因此可以將超凈工作臺分為側(cè)流式、直流式和外流式三種類型。

超凈臺的使用與保養(yǎng)：

1、超凈臺的平均風(fēng)速一般保持在0.32-0.48米/秒，過大、過小均不利于保持臺面潔凈。

2、使用前建議開啟超凈臺內(nèi)紫外燈照射30分鐘，然后打開通風(fēng)系統(tǒng)，讓超凈臺預(yù)工作3-5分鐘，以除去紫外線照射產(chǎn)生的臭氧。

3、使用完畢后，要用75%酒精將臺面和臺內(nèi)四周擦拭干凈，以保證超凈臺無菌。還要定期用支原體祛除試劑清潔超凈臺。

細(xì)胞培養(yǎng)需要一些儀器與大量耗材，比如離心機(jī)、移液器、顯微鏡、培養(yǎng)皿、移液管、離心管等，因此掌握清洗、消毒知識是從事細(xì)胞培養(yǎng)工作所必須的。

1、耗材的消毒

盡量選擇經(jīng)過滅菌的一次性耗材，移液器槍頭可選擇頂部有無菌塞的產(chǎn)品，避免氣溶膠污染。

2、儀器的消毒

對于顯微這樣的精密儀器，用專門的消毒紙巾進(jìn)行擦拭，離心機(jī)、移液器可用75%的酒精進(jìn)行擦拭。

水浴鍋、培養(yǎng)箱中的水應(yīng)至少每4周更換一次，建議加入水槽專用的支原體祛除試劑，預(yù)防支原體污染。

儀器也可采用紫外線照射的方法進(jìn)行消毒：

紫外燈的消毒效果與紫外燈的輻射強度和照射劑量呈正相關(guān)，而輻射強度隨燈距離增加而降低，照射劑量和照射時間呈正比。因此紫外燈同被照射物的距離和照射時間要適合。

一般來說：距離地面高2米的30W紫外線燈可照射9平方米左右的房間，照射時間為1-2小時。燈管離地面2米以外要延長照射時間，2.5米照射效果較差。紫外燈照射工作臺的距離不應(yīng)超過1.5米，照射時間30分鐘為宜。

需要注意的是，紫外線容易使移液器的塑料外殼老化，因此不建議長時間照射。

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