一招解決：細胞培養(yǎng)基混用問題

細胞培養(yǎng)常見問題大匯總——Part 2，繼續(xù)為小伙伴們答疑解惑！

對于購買的商品化細胞來說，產(chǎn)品目錄或者細胞說明書上所推薦的培養(yǎng)基，一般是細胞株的原始提供者推薦的培養(yǎng)基，或者是經(jīng)過驗證的最利于該細胞株生活的培養(yǎng)基。其他培養(yǎng)基存在一定培養(yǎng)風險。因此，應謹慎更換培養(yǎng)基，一定要更換，推薦實驗前預先保留一份細胞種。

更換培養(yǎng)基有兩種方法：

1、直接更換，強制使細胞適應新的培養(yǎng)基；

2、還有一種更溫和的方法，傳代細胞的時候，將新培養(yǎng)基與原推薦使用的培養(yǎng)基1：1混合，并另外分出一板細胞，用原先推薦的培養(yǎng)基。傳代后仔細觀察細胞的生長狀態(tài)，如果混合培養(yǎng)基培養(yǎng)的細胞生長狀態(tài)不好，應立即停止更換培養(yǎng)基。若生長狀態(tài)好，可以繼續(xù)傳代分瓶，一板保留原推薦培養(yǎng)基，另外一板新培養(yǎng)基與原推薦使用的培養(yǎng)基3：1混合，繼續(xù)觀察，如果細胞狀態(tài)好，可以全部換成新鮮的培養(yǎng)基。

普通微生物污染：培養(yǎng)基渾濁，高倍鏡觀察有微生物污染；按規(guī)定棄用并全面嚴格滅菌。

支原體污染：顯微鏡很難直接觀察，細胞通常表現(xiàn)為細胞生長緩慢，有細胞漂浮等等，可通過MB Venor?Gem qEP試劑盒，進行支原體檢測。如發(fā)現(xiàn)支原體污染，應按規(guī)定棄用，實驗室要及時全面消毒滅菌，防止蔓延，推薦使用MB Mycoplasma-off?對細胞培養(yǎng)環(huán)境進行清理 ，使用Water Shield?對水槽進行清潔、預防處理。如果細胞株珍貴，可用MB相關支原體祛除試劑Mynox?、Mynox? Gold、Zell Shield?對細胞進行處理。

細胞要養(yǎng)好，需要選擇品質優(yōu)異的血清，如Ausbian?進口特級胎牛血清，它適合各種細胞培養(yǎng)，尤其適合難養(yǎng)細胞，如：干細胞、肝細胞，神經(jīng)細胞，原代培養(yǎng)、細胞融合、轉染細胞等。

WHO公布的《用動物細胞體外培養(yǎng)生產(chǎn)生物制品規(guī)程》中的要求：

1、牛血清必須來自有文件證明無牛海綿狀腦病的牛群或國家，并應具備適當?shù)谋O(jiān)測系統(tǒng)。

2、有些國家還要求牛血清來自未用過反芻動物蛋白飼料的牛群。

3、證明所用牛血清中不含對所生產(chǎn)疫苗病毒的抑制物。

4、血清要通過濾膜過濾除菌，保證無菌。

5、無細菌、霉菌、支原體和病毒的污染，有些國家要求無細菌噬菌體污染。

6、對細胞有良好的支持繁殖作用。

我國對牛血清的質量中提出比較嚴格的標準要求：

包括蛋白質含量，細菌、真菌、支原體、牛病毒、大腸桿菌噬菌體、細菌內(nèi)毒素，支持細胞增殖檢查。一款來自澳洲的Ausbian?胎牛血清在市場上頗受歡迎。它具有精選內(nèi)毒素極低、產(chǎn)量充足的血清批次，滿足干細胞、基因敲除、原代培養(yǎng)、細胞典藏、長期傳代等各類細胞的培養(yǎng)要求；澳洲血源，完整的檢測報告及滅病毒服務，為各類臨床相關項目的申報提供完整支持等特點。