反復(fù)凍融的血清對細胞有什么影響?

　　血清中因含有許多蛋白質(zhì)，反復(fù)凍融對蛋白的活性肯定會有一定的影響，這似乎已眾所周知。因此，如果幾次內(nèi)用不完，應(yīng)盡量分裝，這不僅適用于血清，也適用于其他儲存于-20℃的蛋白質(zhì)類產(chǎn)品。本文威正翔禹/締一生物為您分析反復(fù)凍融的血清對細胞有什么影響？

　　曾有研究發(fā)現(xiàn)，血清凍融三次，對腫瘤標志物的濃度影響不大¹，對于血漿，有報道在短時間內(nèi)反復(fù)凍融三次，對總蛋白、白蛋白和免疫球蛋白含量影響不大，但作者推測對免疫球蛋白的活性有影響2。最重要的是一篇西北民族學(xué)院的文章，《反復(fù)凍融新生牛血清對促細胞生長效應(yīng)的影響》，作者針對SP2/0細胞，用MEM培養(yǎng)基和三批新生牛血清進行培養(yǎng)。血清分別凍融4次至28次不等。然后繪制細胞生長曲線，根據(jù)公式t =T/A , A=log₂ Y/X計算細胞倍增時間（t 為細胞倍增時間， Y 為細胞峰值前1 d 的細胞數(shù)， X 為接種細胞數(shù)， T 為細胞生長時間）。結(jié)果顯示：選用的三批新生牛血清在反復(fù)凍融 28 次時， 血清促細胞生長的**增殖量變化不大，均高于1×10⁶/mL, 但是血清促細胞生長的倍增時間在反復(fù)凍融 20次時延長， 即血清促細胞繁殖一代所需的時間在凍融次數(shù)達到 20 次時顯著增加。筆者觀察了一下該文章的結(jié)果列表，發(fā)現(xiàn)在凍融20次之前，細胞倍增時間延長2-3小時不等，20次時，則延長3-4小時。可見，影響還是比較顯著的。該文章的局限是針對新生牛血清，而沒有對胎牛血清進行測試。

　　國外有人對大鼠血清中的18種化學(xué)成分進行了檢測，發(fā)現(xiàn)反復(fù)凍融3次對其中的14種成分沒有顯著影響，其他肌酸激酶，甘油三酯，葡萄糖，膽紅素，甚至包括氯離子有一些明顯變化，但其濃度變化控制在10%以內(nèi)。³

　　總而言之，如果能避免牛血清的反復(fù)凍融，及時分裝，那是最理想的。如果在短時間內(nèi)有幾次反復(fù)凍融，也不必過于擔(dān)心。但是，對于胎牛血清，還有一個問題，是反復(fù)凍融增高了血清產(chǎn)生沉淀或渾濁的風(fēng)險。因為血清在融化時，冰塊和蛋白融化的速度是不一樣的，局部可能因蛋白濃度過高而產(chǎn)生沉淀。同時，如果血清內(nèi)含有少量纖維蛋白原，那么在低溫下也可以形成絮狀沉淀⁴，等到血清再融化時，沉淀就顯現(xiàn)出來了。所以，血清的質(zhì)量也非常重要。

　　參考文獻

　　1、血清反復(fù)凍融對腫瘤標志物濃度的影響。 《中國實驗診斷學(xué)》2007, 11 （1） :119-120

　　2、普通血漿短時間內(nèi)反復(fù)凍融對血漿蛋白的影響。《中國輸血雜志》， 2012 , 25 （11） :1209-1209

　　3、Effect of repeated freezing and thawing on 18 clinical chemistry analytes in rat serum. Journal of the American Association for Laboratory Animal Science: JAALAS ·2012,51（4）：475-478

　　4、凍融法提取豬血纖維蛋白原。《分析試驗室》，2007,26（4）：65-68

　　綜上所述，您是不是已經(jīng)對反復(fù)凍融的血清對細胞有什么影響，有所了解。如果還有其他疑問，請咨詢威正翔禹/締一生物資深專家免費熱線：400-166-8600。