祛除實(shí)驗(yàn)室中恒溫水環(huán)境中的支原體污染，提高實(shí)驗(yàn)結(jié)果穩(wěn)定性

在細(xì)胞實(shí)驗(yàn)過程中，需要用到裝有恒溫水的儀器，對(duì)樣品進(jìn)行處理或給細(xì)胞培養(yǎng)提供支持，例如水浴鍋、培養(yǎng)箱水槽等設(shè)備。作為維持細(xì)胞生長(zhǎng)與實(shí)驗(yàn)條件穩(wěn)定的關(guān)鍵設(shè)施，其清潔與無菌狀態(tài)直接關(guān)系到實(shí)驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性和可靠性。

實(shí)驗(yàn)室中常見的恒溫水浴環(huán)境有哪些？

細(xì)胞實(shí)驗(yàn)室中的恒溫水浴環(huán)境主要包括水浴鍋、培養(yǎng)箱中水槽以及用于某些實(shí)驗(yàn)步驟的恒溫平臺(tái)等。這些設(shè)備通過精確控制溫度，為細(xì)胞培養(yǎng)、等提供了穩(wěn)定的實(shí)驗(yàn)條件。然而，這些穩(wěn)定的環(huán)境也為微生物的生長(zhǎng)提供了便利條件。

為什么恒溫水浴環(huán)境容易發(fā)生支原體污染？

溫度適宜：支原體是一類對(duì)溫度敏感的微生物，恒溫水浴提供的穩(wěn)定溫度恰好符合其生長(zhǎng)需求，使得支原體得以迅速增殖。

濕度較高：恒溫水浴環(huán)境通常保持一定的濕度，有利于微生物的生存和繁殖。

營(yíng)養(yǎng)源豐富：一旦細(xì)胞實(shí)驗(yàn)室中清潔工作稍有松懈，細(xì)胞培養(yǎng)過程中使用的培養(yǎng)基、血清等富含營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的試劑，混入到恒溫水浴環(huán)境中，很容易成為支原體的食物來源。

操作頻繁：實(shí)驗(yàn)人員頻繁地打開和關(guān)閉水浴箱蓋，以及使用未徹底消毒的器材，都會(huì)增加支原體污染的風(fēng)險(xiǎn)。

為什么要預(yù)防支原體污染？

細(xì)胞形態(tài)改變：支原體感染會(huì)導(dǎo)致細(xì)胞形態(tài)發(fā)生不規(guī)則變化，如細(xì)胞大小改變、細(xì)胞膜破壞等，影響細(xì)胞的正常生理功能。

生長(zhǎng)受抑制：支原體污染會(huì)干擾細(xì)胞的正常生長(zhǎng)和增殖過程，導(dǎo)致細(xì)胞數(shù)量減少或生長(zhǎng)速率減緩。

基因表達(dá)和蛋白質(zhì)合成異常：支原體感染可能引起細(xì)胞內(nèi)基因表達(dá)的異常，影響蛋白質(zhì)合成和細(xì)胞信號(hào)傳導(dǎo)途徑，進(jìn)而影響細(xì)胞的生物學(xué)功能。

細(xì)胞凋亡增加：部分支原體感染會(huì)誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡（程序性細(xì)胞死亡），導(dǎo)致細(xì)胞數(shù)量減少和形態(tài)學(xué)變化。

影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果： 由于支原體感染引起的細(xì)胞變化，實(shí)驗(yàn)結(jié)果可能會(huì)受到嚴(yán)重干擾，導(dǎo)致數(shù)據(jù)不準(zhǔn)確、可重復(fù)性差。這對(duì)于依賴細(xì)胞生物學(xué)特性、信號(hào)傳導(dǎo)途徑或藥物反應(yīng)等研究的實(shí)驗(yàn)結(jié)果尤為重要。錯(cuò)誤的實(shí)驗(yàn)結(jié)果不僅會(huì)影響科學(xué)研究的進(jìn)展，還可能誤導(dǎo)臨床應(yīng)用和藥物開發(fā)。

如何預(yù)防恒溫水浴環(huán)境發(fā)生支原體污染？

一、加強(qiáng)實(shí)驗(yàn)室環(huán)境管理

保持實(shí)驗(yàn)室的清潔度和無菌狀態(tài)，定期清潔和消毒恒溫水浴設(shè)備及其周圍環(huán)境。每天為水浴鍋、培養(yǎng)箱水槽更換無菌水，能減少一部分污染的發(fā)生，但在實(shí)際操作過程中這樣的處理無疑是耗時(shí)又耗力的，為了解決這一問題，往往需要在細(xì)胞培養(yǎng)相關(guān)的恒溫水中加入抑菌試劑。這類試劑的選擇也十分有講究。我們?nèi)粘Ｉ钪械某Ｒ姷囊志芤河羞@幾種：次氯酸、硫酸銅、新潔爾滅、次氯酸鈉，但以上幾種溶液都有難以規(guī)避的缺點(diǎn)。次氯酸容易分解，與病菌作用后就會(huì)降解，無法持續(xù)作用，且無法對(duì)失效的消毒液做出指示；硫酸銅和新潔爾滅容易腐蝕水盤；次氯酸鈉溶液易揮發(fā)出次氯酸，對(duì)細(xì)胞造成傷害。我們選擇消毒液的關(guān)鍵點(diǎn)，就是成分安全穩(wěn)定、不會(huì)損害儀器、不易揮發(fā)影響細(xì)胞。市場(chǎng)上主流的水環(huán)境支原體預(yù)防試劑——德國(guó)MB公司生產(chǎn)的Water Shield，可以很好地解決以上問題。

該試劑含有表面活性劑和季銨化合物，并且配合絡(luò)合劑成分，有效抑制微生物生長(zhǎng)的同時(shí)，還能保持水分。另外，水槽支原體預(yù)防試劑Water Shield本身不會(huì)導(dǎo)致水垢產(chǎn)生，兼容玻璃、陶瓷、塑料、橡膠、鋼、貴金屬和其他金屬，不會(huì)腐蝕儀器。

不僅如此，水槽支原體預(yù)防試劑Water Shield本身也是一個(gè)“指示器”，在微生物嚴(yán)重污染、需要更換水的情況下溶液會(huì)從淺藍(lán)色變?yōu)闊o色，保證消毒溶液的有效性。

產(chǎn)品成分不含醛或疊氮化物，不會(huì)揮發(fā)。因此，水槽支原體預(yù)防試劑Water Shield對(duì)于CO2培養(yǎng)箱中的細(xì)胞是安全的。

按照正確的使用說明操作處理后的液體，在長(zhǎng)達(dá)4周內(nèi)，不會(huì)受到細(xì)菌、真菌和支原體的污染。

使用起來也很方便快捷。水槽支原體預(yù)防試劑Water Shield是200倍濃縮液。CO2培養(yǎng)箱水槽大概是一般為1-2L水只需添加一瓶10ml即可。而且該試劑僅需室溫儲(chǔ)存，降低了對(duì)儲(chǔ)存設(shè)備的要求。

二、嚴(yán)格把控試劑和培養(yǎng)基質(zhì)量：除了做好實(shí)驗(yàn)室的清潔工作，選擇高品質(zhì)的實(shí)驗(yàn)試劑，也是實(shí)驗(yàn)成功對(duì)的重要保障。以細(xì)胞實(shí)驗(yàn)中常見的胎牛血清為例。

三、規(guī)范細(xì)胞培養(yǎng)操作：遵守?zé)o菌操作規(guī)范，使用一次性或經(jīng)過嚴(yán)格消毒的器材進(jìn)行細(xì)胞培養(yǎng)。減少在恒溫水浴環(huán)境中的停留時(shí)間，避免交叉污染。

四、定期檢測(cè)微生物污染風(fēng)險(xiǎn)：定期對(duì)實(shí)驗(yàn)室環(huán)境和恒溫水浴系統(tǒng)進(jìn)行微生物污染檢測(cè)，包括支原體污染的檢測(cè)。一旦發(fā)現(xiàn)污染問題，立即采取措施進(jìn)行處理。

祛除細(xì)胞實(shí)驗(yàn)室中恒溫水浴環(huán)境中的支原體污染是保障實(shí)驗(yàn)結(jié)果穩(wěn)定性的重要環(huán)節(jié)。通過加強(qiáng)實(shí)驗(yàn)室環(huán)境管理、嚴(yán)格把控試劑和培養(yǎng)基質(zhì)量、規(guī)范細(xì)胞培養(yǎng)操作以及定期檢測(cè)微生物污染風(fēng)險(xiǎn)等措施，我們可以有效降低支原體污染的風(fēng)險(xiǎn)，為細(xì)胞培養(yǎng)和科學(xué)研究提供安全、可靠的環(huán)境保障。