細(xì)胞培養(yǎng)過程中出現(xiàn)白色絮狀物的原因

細(xì)胞培養(yǎng)過程中出現(xiàn)白色絮狀物，污染因素是最常見的原因之一。

細(xì)胞培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)室的環(huán)境要求極為嚴(yán)格，任何微小的污染都可能導(dǎo)致細(xì)胞培養(yǎng)失敗。細(xì)菌、真菌、霉菌和支原體等微生物污染是細(xì)胞培養(yǎng)中常見的問題。細(xì)菌污染后，培養(yǎng)液通常會變得渾濁，顏色變黃，顯微鏡下可見黑色細(xì)沙狀或桿狀物，其代謝產(chǎn)物會導(dǎo)致培養(yǎng)液的pH值急劇下降。真菌污染則相對隱蔽，培養(yǎng)液可能保持清亮，但在顯微鏡下可見絲狀物或珊瑚狀結(jié)構(gòu)，隨著時(shí)間推移，可能會出現(xiàn)黑色絲狀物。霉菌污染早期難以察覺，培養(yǎng)液清亮，但會出現(xiàn)絮狀雜質(zhì)，鏡下可見細(xì)絲狀團(tuán)狀漂浮物。支原體污染更為隱蔽，培養(yǎng)液一般不會渾濁，pH值也無明顯變化，但細(xì)胞生長會逐漸變慢，最終可能導(dǎo)致細(xì)胞死亡。

此外，操作過程中的不規(guī)范行為也是導(dǎo)致污染的重要因素。實(shí)驗(yàn)人員進(jìn)入培養(yǎng)室前未更換專用實(shí)驗(yàn)服和拖鞋，未洗手或未戴口罩和手套，頻繁出入培養(yǎng)室，都可能將外界微生物帶入培養(yǎng)環(huán)境中。在操作過程中，未靠近火焰進(jìn)行操作，試劑瓶未經(jīng)火焰灼燒消毒，吸管使用不當(dāng)，細(xì)胞和培養(yǎng)基的敞口時(shí)間過長等，都可能增加污染的風(fēng)險(xiǎn)。一旦發(fā)生污染，不僅會影響細(xì)胞的生長和實(shí)驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性，還可能導(dǎo)致整個(gè)細(xì)胞培養(yǎng)體系的崩潰。

培養(yǎng)基成分問題

培養(yǎng)基是細(xì)胞培養(yǎng)的核心成分，其質(zhì)量直接影響細(xì)胞的生長狀態(tài)。培養(yǎng)基中的成分問題也可能導(dǎo)致細(xì)胞培養(yǎng)中出現(xiàn)白色絮狀物。培養(yǎng)基中的鹽類成分如果濃度過高或過低，可能導(dǎo)致細(xì)胞生長異常，甚至出現(xiàn)沉淀物。例如，培養(yǎng)基中的NaHCO3濃度不正確，會影響培養(yǎng)液的pH值緩沖能力，進(jìn)而影響細(xì)胞的生長環(huán)境。此外，培養(yǎng)基中的氨基酸、維生素等營養(yǎng)成分如果不足或比例失調(diào)，也可能導(dǎo)致細(xì)胞代謝異常，產(chǎn)生絮狀物。

培養(yǎng)基的保存條件也極為重要。培養(yǎng)基應(yīng)放置于4℃，避光保存，并盡量在一周內(nèi)使用完畢。如果培養(yǎng)基在保存過程中發(fā)生變質(zhì)或受到污染，也可能導(dǎo)致細(xì)胞培養(yǎng)中出現(xiàn)異常現(xiàn)象。例如，培養(yǎng)基中的谷氨酰胺在溶液中經(jīng)過一段時(shí)間后會降解，產(chǎn)生氨，而氨對于一些細(xì)胞具有毒性。此外，培養(yǎng)基中的酚紅作為pH值指示劑，可能會干擾某些檢測實(shí)驗(yàn)，因此在進(jìn)行流式細(xì)胞檢測時(shí)，建議使用不加酚紅的培養(yǎng)基。

總之，細(xì)胞培養(yǎng)中出現(xiàn)白色絮狀物的原因多種多樣，污染因素和培養(yǎng)基成分問題是其中最常見的原因。為了確保細(xì)胞培養(yǎng)的成功，必須嚴(yán)格遵守?zé)o菌操作規(guī)范，定期檢測培養(yǎng)環(huán)境和培養(yǎng)基的質(zhì)量，及時(shí)發(fā)現(xiàn)并處理潛在的問題。

4. 診斷與檢測方法

4.1 顯微鏡觀察

顯微鏡觀察是診斷細(xì)胞培養(yǎng)中出現(xiàn)白色絮狀物的重要手段，能夠快速、直觀地識別問題的性質(zhì)。

低倍鏡觀察：低倍鏡下可以初步判斷絮狀物的大致形態(tài)和分布情況。如果絮狀物呈現(xiàn)明顯的絲狀或珊瑚狀結(jié)構(gòu)，可能是真菌污染；如果培養(yǎng)液中出現(xiàn)大量細(xì)小的顆粒狀物，且分布較為均勻，可能是細(xì)菌污染。此外，還可以觀察細(xì)胞的整體生長狀態(tài)，如細(xì)胞是否貼壁良好、形態(tài)是否正常等，從而初步判斷絮狀物對細(xì)胞生長的影響程度。

高倍鏡觀察：高倍鏡下可以更清晰地觀察絮狀物的細(xì)節(jié)特征。對于細(xì)菌污染，高倍鏡下可以看到細(xì)小的桿狀或球狀細(xì)菌，甚至可以觀察到細(xì)菌的運(yùn)動；對于真菌污染，高倍鏡下可以看到真菌的菌絲和孢子，菌絲通常呈現(xiàn)細(xì)長的絲狀結(jié)構(gòu)，孢子則可能呈現(xiàn)不同的形態(tài)和顏色。此外，還可以觀察細(xì)胞內(nèi)部的結(jié)構(gòu)變化，如細(xì)胞核是否正常、細(xì)胞質(zhì)中是否有異常顆粒等，從而進(jìn)一步判斷細(xì)胞是否受到污染或損傷。

相差顯微鏡觀察：相差顯微鏡可以觀察細(xì)胞和絮狀物的細(xì)微結(jié)構(gòu)和光學(xué)差異。對于細(xì)胞代謝產(chǎn)物導(dǎo)致的絮狀物，相差顯微鏡下可以看到絮狀物與細(xì)胞之間的相對位置和相互關(guān)系，從而判斷絮狀物是否與細(xì)胞代謝有關(guān)。此外，相差顯微鏡還可以觀察細(xì)胞的生長狀態(tài)和代謝活動，如細(xì)胞的分裂、吞噬等現(xiàn)象，從而為診斷絮狀物的性質(zhì)提供更多的線索。